一般來說，三伏貼在每年農歷三伏天期間進行。具體時間區間為初伏、中伏和末伏的每伏第一天開始，持續貼敷3 - 5天。通常初伏在夏至後的第三個庚日，中伏在夏至後的第四個庚日，末伏在立秋後的第一個庚日。
三伏天是一年中氣溫最高且潮濕悶熱的時段，人體陽氣在此時最為旺盛，體表經絡中氣血也最為充盈。三伏貼正是利用這一特點，將特殊調配的中藥膏劑貼敷在特定穴位上。通過藥物對穴位的溫熱刺激，激發經氣活動，使藥物持續作用於經絡臟腑，調節人體陰陽平衡，增強機體免疫力。
在三伏天進行三伏貼，能達到冬病夏治的效果。對於一些冬季易發作或加重的疾病，如慢性支氣管炎、支氣管哮喘、過敏性鼻炎、虛寒性胃痛、風濕與類風濕性關節炎等，有較好的預防和治療作用。貼敷後，藥物的有效成分會逐漸滲透入體內，改善人體的內環境，增強機體抵御外邪的能力，減少疾病在冬季的發作頻率和症狀嚴重程度。
進行三伏貼後，要注意保持貼敷部位清潔乾燥，避免劇烈運動導致出汗過多影響藥物吸收。貼敷期間飲食宜清淡，避免食用生冷、辛辣、油膩等刺激性食物。若貼敷部位出現輕微紅腫、瘙癢等現象，屬於正常反應，無需特殊處理；若出現嚴重過敏等不適症狀，應及時就醫。同時，三伏貼需在專業醫生指導下進行，以確保選穴準確、用藥恰當，達到最佳治療效果。
