診斷梅毒的實驗室檢查主要有病原學檢查、血清學檢查、腦脊液檢查、組織病理檢查及核酸檢測。有高危行為或可疑症狀，如生殖器異常、皮疹等，要及時就醫詳述情況以準確診斷。
1.病原學檢查：用暗視野顯微鏡查硬下疳等部位滲出液或組織液中的梅毒螺旋體，早期診斷意義大，但晚期及隱性患者陽性率低，操作複雜，需專業人員與設備，受取材和技術影響。
2.血清學檢查：有非梅毒螺旋體抗原血清試驗和梅毒螺旋體抗原血清試驗。前者用於篩查與療效判斷，簡便低成本但易假陽性；後者特異性高用於確診，試劑成本高，不能區分現症和既往感染。
3.腦脊液檢查：經腰椎穿刺查腦脊液細胞計數等指標診斷神經梅毒，適用於有神經系統症狀或晚期患者，可判斷神經系統受累情況，但屬侵入性操作有風險，檢查前要充分告知患者可能的不適。
4.組織病理檢查：取病變組織切片觀察病理變化輔助診斷，不過取材要求高，準確性依賴病理醫生經驗技術，有創且非常規方法，多用於疑難病例診斷研究。
5.核酸檢測：PCR 技術檢測梅毒螺旋體核酸，靈敏特異，可用於早期、胎傳梅毒診斷及療效監測，但對實驗室和人員要求嚴，易污染致假陽性，尚未廣泛用於臨床，多作輔助診斷。
為預防梅毒，要避免不潔性行為，保持單一性伴並正確用安全套，注重個人衛生，不共用牙刷等可能接觸血液物品。若懷疑感染，性伴侶應同時檢查治療，治療期避免性生活，定期復查確保治癒，防止傳播復發。
