蛛網膜下隙穿刺術的方法有側臥位穿刺法、坐位穿刺法、小兒穿刺法、肥胖患者穿刺法、疑難患者超聲引導穿刺法等。
1. 側臥位穿刺法：患者取側臥位，背部與床面垂直，頭向前胸部屈曲，兩手抱膝緊貼腹部，使脊柱盡量後凸以增寬椎間隙，便於進針。一般選擇腰3 - 4椎間隙為穿刺點，常規消毒、鋪巾、局部麻醉後，用穿刺針垂直於脊背平面緩慢刺入，當感到阻力突然消失時，表明已進入蛛網膜下隙，拔出針芯可見腦脊液流出。
2. 坐位穿刺法：患者坐在椅子上，身體前屈，雙手放在椅背上。穿刺點選擇同側臥位，消毒、麻醉後，穿刺針垂直或稍向頭側傾斜刺入蛛網膜下隙。此方法適用於顱內壓明顯增高或病情較重不宜變動體位的患者，但有一定風險，需謹慎操作。
3. 小兒穿刺法：小兒脊髓相對較長，穿刺時應選擇較低的椎間隙，如腰4 - 5椎間隙。操作時需固定好患兒體位，動作輕柔、準確，避免損傷脊髓。
4. 肥胖患者穿刺法：肥胖患者的椎間隙不易辨認，可先用手指在椎間隙上下觸摸，確定穿刺點。進針時可能需要稍用力，且進針深度可能較深，要密切注意進針的手感。
5. 疑難患者超聲引導穿刺法：對於因脊柱畸形、肥胖等原因導致穿刺困難的患者，可在超聲引導下進行穿刺。超聲能清晰顯示脊柱的解剖結構，幫助準確找到穿刺點和進針路徑，提高穿刺成功率。
在進行蛛網膜下隙穿刺術時，要嚴格遵循無菌操作原則，密切觀察患者的生命體徵和反應。穿刺過程中若出現異常情況，應立即停止操作並進行相應處理。術後讓患者去枕平臥一段時間，防止低顱壓頭痛等併發症的發生。
